熒光原位雜交

技術(shù)簡(jiǎn)介

原位雜交(in situ hybridization)是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過(guò)程。與傳統(tǒng)的放射性標(biāo)記原位雜交相比，熒光原位雜交具有快速、檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)、雜交特異性高和可以多重染色等特點(diǎn)。廣泛應(yīng)用于染色體精細(xì)結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感染分析、人類產(chǎn)前診斷、腫瘤遺傳學(xué)和基因組進(jìn)化研究等許多領(lǐng)域。

熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization, FISH)則是在放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種非放射性分子細(xì)胞遺傳技術(shù)，以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記的原位雜交方法，是利用熒光標(biāo)記的DNA探針來(lái)檢測(cè)在細(xì)胞、組織和腫瘤的特定DNA序列的分子診斷技術(shù)。首先將樣本DNA變性，加入特定的熒光標(biāo)記的探針與變性的樣本混合進(jìn)行雜交，退火得到雙鏈DNA。探針信號(hào)能夠被熒光顯微鏡捕獲，從而定性、定量地檢測(cè)目標(biāo)DNA。與其它用于研究染色體的技術(shù)不同，F(xiàn)ISH操作靈活，不需要在正在分裂的細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，因而能夠用來(lái)檢測(cè)基因或染色體是否異常，通常用于遺傳咨詢，醫(yī)學(xué)和品種鑒定、DNA特定功能研究。利用FISH方法還可檢測(cè)非整倍體，微缺失綜合征以及基因重排等，這些指標(biāo)對(duì)遺傳性疾病，如白血病，淋巴瘤，實(shí)體瘤，自閉癥等發(fā)育綜合征有重要的臨床意義。

實(shí)驗(yàn)原理

熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization, FISH)是20世紀(jì)80年代末在放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種非放射性分子細(xì)胞遺傳技術(shù)，以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法，具有安全、快速、靈敏度高、探針保存時(shí)間長(zhǎng)、能同時(shí)顯示多種顏色等優(yōu)點(diǎn)。

實(shí)驗(yàn)流程

1. 根據(jù)客戶送的樣本(固定好或者包埋好)，以及樣本類型，安排實(shí)驗(yàn)

2. 包埋或者切片后，根據(jù)客戶所測(cè)指標(biāo)，設(shè)計(jì)特異性探針，標(biāo)記示蹤物。然后進(jìn)行一系列反應(yīng)

3. (可選)根據(jù)上述所做好的切片進(jìn)行拍片，分為熒光顯微鏡(激光共聚焦顯微鏡)或普通光學(xué)顯微鏡

4. (可選)針對(duì)做好的玻片進(jìn)行分析，分析時(shí)選取較好的區(qū)域，分析三個(gè)視野

5. 提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告：包括詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方法及原位雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)圖表

周期報(bào)價(jià)

周期：1-2 周

價(jià)格：400 元/張

熒光原位雜交的優(yōu)勢(shì)

高度特異性

極高信噪比

可對(duì)多種形式的樣本進(jìn)行檢測(cè)

一張片上展現(xiàn)多種RNA/DNA分子的表達(dá)分布和相對(duì)豐度

客戶提供

待測(cè)樣本信息

待測(cè)目的基因序列，GeneID或者Accession Number等

樣本量信息及檢測(cè)要求等

樣本運(yùn)輸要求

冰凍切片：標(biāo)本放原位雜交固定液中，常溫運(yùn)輸;冰凍切片-20℃運(yùn)輸

石蠟切片：標(biāo)本放原位雜交固定液中，常溫運(yùn)輸;石蠟切片常溫運(yùn)輸

細(xì)胞爬片：細(xì)胞爬片加原位雜交固定液固定15min后，密封，-20℃運(yùn)輸

新鮮組織：組織取出后可以立即冷凍處理，后干冰運(yùn)輸

樣品制備

我們?yōu)槎鄠€(gè)FISH應(yīng)用建立了實(shí)驗(yàn)方案以增強(qiáng)靈敏度和信號(hào)，包括：

細(xì)胞染色體FISH(間期，中期和培養(yǎng)的細(xì)胞)

組織染色體FISH(福爾馬林固定的、石蠟包埋組織切片或細(xì)胞玻片)

RNA-FISH(細(xì)胞內(nèi)RNA定位，RNA加工，定量)

結(jié)果交付

原始雜交顯色拍照結(jié)果圖片

完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括實(shí)驗(yàn)過(guò)程、所用儀器試劑、蠟塊玻片和相關(guān)分析數(shù)據(jù)

項(xiàng)目案例

服務(wù)承諾

1. 會(huì)在最短的時(shí)間內(nèi)快速將實(shí)驗(yàn)完成。

2. 保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、客觀、可信，但不能確保一定要得到某特定結(jié)果。