支原體污染檢測(cè)技術(shù)服務(wù)

    技術(shù)簡(jiǎn)介

    支原體，直徑在0.1-0.3微米，是目前發(fā)現(xiàn)的最小的最簡(jiǎn)單的原核生物，可以輕松地通過(guò)濾膜，混入培養(yǎng)系統(tǒng)中，呈高度多形性形態(tài)。支原體是實(shí)驗(yàn)室中常見(jiàn)的污染細(xì)胞的原核生物，能夠抑制細(xì)胞代謝和生長(zhǎng)，改變核酸合成，影響細(xì)胞抗原性，導(dǎo)致染色體改變等。因此每一株外來(lái)細(xì)胞都應(yīng)進(jìn)行支原體檢測(cè)，并且應(yīng)對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞進(jìn)行定期支原體檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)室采用PCR檢測(cè)法鑒定支原體污染現(xiàn)象，并用專門的試劑進(jìn)行清除。

    為什么要做支原體污染清除與檢測(cè)

    當(dāng)實(shí)驗(yàn)室建立新的細(xì)胞系 ，細(xì)胞功能不正常，文章發(fā)表，國(guó)外期刊雜志要求，細(xì)胞凍存之前或?qū)嶒?yàn)室細(xì)胞常規(guī)定期檢測(cè)時(shí)，需要進(jìn)行支原體污染檢測(cè)。從2013年開(kāi)始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細(xì)胞培養(yǎng)都要進(jìn)行支原體檢測(cè)。以細(xì)胞為載體的科學(xué)研究，如果不能保證所用的細(xì)胞無(wú)支原體污染，則實(shí)驗(yàn)結(jié)果很可能是極端不可靠甚至是完全錯(cuò)誤的。

    支原體具有變形能力，可透過(guò)常見(jiàn)過(guò)濾膜(0.22-0.45 μm)，因此常規(guī)的無(wú)菌過(guò)濾方法不能將其去除，常用的抗生素也對(duì)支原體無(wú)效。支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一個(gè)世界性問(wèn)題，世界各國(guó)細(xì)胞系支原體污染的平均比例為30-60%。支原體可通過(guò)細(xì)胞之間交叉污染，操作人員的口腔、皮膚造成污染，或者血清等添加物而帶入污染。

    支原體在光學(xué)顯微鏡下不可見(jiàn)，一般不會(huì)引起培養(yǎng)物混濁，因此細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺(jué)。支原體會(huì)消耗必須氨基酸，影響細(xì)胞生長(zhǎng)速率，促進(jìn)代謝物積累，改變細(xì)胞形態(tài)，影響 DNA、RNA 以及蛋白質(zhì)的合成，抑制細(xì)胞因子表達(dá)，改變被污染細(xì)胞的基因表達(dá)譜，誘導(dǎo)染色體畸變。

    操作流程

    服務(wù)對(duì)象

    實(shí)驗(yàn)室的種子細(xì)胞，如從ATCC、JCRB、DMSZ等國(guó)外權(quán)威細(xì)胞庫(kù)采購(gòu)的珍貴細(xì)胞系；

    組織珍貴的原代細(xì)胞；

    需要進(jìn)行基因編輯的細(xì)胞；

    各類干細(xì)胞(含iPS細(xì)胞)；

    稀有細(xì)胞

    服務(wù)內(nèi)容

    根據(jù)客戶提供的細(xì)胞名稱、細(xì)胞代次、細(xì)胞類型制定細(xì)胞的支原體清除方案

    根據(jù)支原體特異性基因設(shè)計(jì)引|物，PCR法檢測(cè)支原體污染程度

    提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告 (中英文報(bào)告)、原始圖片和無(wú)支原體污染的細(xì)胞

周期：1-2 周

報(bào)價(jià)：1200元/株

    樣本運(yùn)輸要求

    細(xì)胞懸液：用T25培養(yǎng)瓶培養(yǎng)活細(xì)胞一瓶，細(xì)胞融合度50-60%,充滿培養(yǎng)基，標(biāo)明細(xì)胞名稱，常溫運(yùn)輸。

    凍存細(xì)胞：收集活細(xì)胞沉淀，加入1ml凍存液,用2ml無(wú)菌凍存管保存,標(biāo)明細(xì)胞名稱，干冰運(yùn)輸

    細(xì)胞支原體污染檢測(cè)技術(shù)服務(wù)委托單

    項(xiàng)目案例